Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade

??【產(chǎn)品基礎(chǔ)信息】

- 貨號(hào)：V5071、V5072、V5073

- 英文名：Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade  

- 中文名：Trypsin/賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶混合液（質(zhì)譜級(jí)）  

- 品牌：Promega

- 規(guī)格：20ug、100ug

- 應(yīng)用領(lǐng)域：蛋白質(zhì)組學(xué)研究、質(zhì)譜樣品制備、翻譯后修飾分析、凝膠內(nèi)消化等  

??【詳細(xì)介紹】  

1. 產(chǎn)品組成與技術(shù)原理  

V5071是Promega研發(fā)的Trypsin與賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶（Lys-C）的復(fù)合型蛋白酶混合物，專為質(zhì)譜分析優(yōu)化設(shè)計(jì)。  

- Trypsin：特異性切割賴氨酸（K）和Arg（R）羧基端，是蛋白組學(xué)常用的酶之一。  

- Lys-C：專一性切割賴氨酸羧基端，與Trypsin互補(bǔ)，減少漏切位點(diǎn)，提升序列覆蓋率。  

兩者協(xié)同作用，可覆蓋更廣泛的切割位點(diǎn)，尤其適用于復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物的消化。  

2. 核心應(yīng)用場(chǎng)景  

- 質(zhì)譜樣品制備：用于膠內(nèi)消化（如SDS-PAGE膠）或溶液內(nèi)消化，顯著降低漏切率。  

- 翻譯后修飾分析：精準(zhǔn)識(shí)別磷酸化、糖基化等修飾位點(diǎn)，減少假陽(yáng)性結(jié)果。  

- 低豐度蛋白檢測(cè)：高酶活性設(shè)計(jì)適合微量樣本（如單細(xì)胞裂解液）的蛋白提取與鑒定。  

3. 技術(shù)特點(diǎn)  

- 高純度：采用基因重組技術(shù)生產(chǎn)，經(jīng)HPLC純化，無(wú)動(dòng)物源性污染。  

- 低自水解活性：通過(guò)化學(xué)修飾抑制酶自身降解，確保長(zhǎng)期穩(wěn)定性（自水解率<0.1%）。  

- 廣泛兼容性：適用于酸性（pH 2-3）至中性（pH 7-8）環(huán)境，可搭配ProteaseMAX™表面活性劑提升膠內(nèi)消化效率。  

??【核心優(yōu)勢(shì)詳解】  

1. 精準(zhǔn)切割，提升數(shù)據(jù)可靠性  

- 雙酶協(xié)同：Trypsin與Lys-C的切割位點(diǎn)互補(bǔ)，減少因單一酶切割導(dǎo)致的序列覆蓋不全問(wèn)題。例如，在膠原蛋白等富含氨酸/賴氨酸的蛋白中，Lys-C可補(bǔ)充Trypsin的切割盲區(qū)。  

- 低背景噪音：經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)檢，非特異性切割活性低于0.05%，確保質(zhì)譜信號(hào)清晰。  

2. 高靈敏度與重復(fù)性  

- 低用量高效能：推薦酶:底物比為1:50至1:100，消化時(shí)間縮短至2小時(shí)內(nèi)（傳統(tǒng)酶需12小時(shí)以上）。  

- 批次一致性：每批次通過(guò)質(zhì)譜驗(yàn)證，確保切割模式穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)。  

3. 靈活適應(yīng)復(fù)雜樣本  

- 膠內(nèi)消化優(yōu)化：與Promega ProteaseMAX™聯(lián)用，可提升膠內(nèi)蛋白回收率至90%以上。  

- 抗干擾能力強(qiáng)：對(duì)SDS、尿素等去垢劑耐受性高，適用于變性條件下的蛋白處理。  

4. 用戶友好設(shè)計(jì)  

- 即用型配方：預(yù)混酶液無(wú)需配制，直接加入樣本即可啟動(dòng)反應(yīng)。  

- 低溫保存穩(wěn)定：-20℃短期保存（建議分裝后-80℃長(zhǎng)期存放），避免反復(fù)凍融。  

?【常見(jiàn)問(wèn)題與解答】

Q1：V5071與普通Trypsin有何區(qū)別？  

A：V5071為Trypsin/Lys-C復(fù)合酶，切割位點(diǎn)更廣，漏切率更低；普通Trypsin僅依賴單一酶切，易遺漏部分修飾位點(diǎn)。  

Q2：能否用于固定化金屬親和層析（IMAC）樣本制備？  

A：可以。V5071兼容金屬螯合樹(shù)脂，但需優(yōu)化消化時(shí)間以避免金屬離子干擾酶活性。  

Q3：消化后的肽段如何純化？  

A：推薦使用C18固相萃取柱（如Promega Sep-Pak®）或HPLC純化，去除酶及鹽分。  

Q4：是否支持自動(dòng)化工作站操作？  

A：是的。V5071已通過(guò)主流液體處理系統(tǒng)驗(yàn)證，適用于高通量樣本處理。  

Q5：長(zhǎng)期保存后酶活性會(huì)下降嗎？  

A：若按推薦條件（-20℃分裝保存）存放，活性可維持12個(gè)月以上。建議開(kāi)封后立即分裝冷凍。  

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