熒光金---神經逆行示蹤檢測COA

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Hydroxystilbamidine (FluoroGold)

Catalog #: 780000

Selection:20 mg

Price：2600

Product Description

Hydroxystilbamidine has been used extensively as a retrograde tracer for neurons and also a histochemical stain. Please also see hydroxystilbamidine 4% in H₂O (80023), which is a more convenient, ready-to-use form.

• λ_Ex/λ_Em = 361/536 nm

• Yellow solid soluble in water

• Store at 4°C and protect from light

• C₁₈H₂₄N₄O₇S₂

• MW: 473

FluoroGold is a trademark of Fluorochrome, LLC.

MSDS (PDF): MSDS 80014

相關應用資料：

神經示蹤劑應用背景：神經示蹤劑常用于闡明神經系統的解剖。示蹤劑可以順行，從軸突到胞體；也可以逆行，從胞體到軸突。在這些示蹤劑的幫助下，可以確認軸突的起源細胞，他們支配某種特定結構形成；也可以鑒別從某一特定的神經元出來的軸突投射的目標位置。

Fluoro-GoldTM 熒光金（神經逆行示蹤檢測）

產品背景

Fluoro-GoldTM是當今世界上應用zui普遍和非常有效的神經逆行示蹤劑，Fluorogold也稱為羥脒替（hydroxystilbamidine），是Fluorochrome, LLC.公司的專有產品，于1985年開始范圍內銷售。

Fluoro-GoldTM antibody （抗體）為Fluorochrome, LLC.特別開發的高靈敏度抗體，能夠大幅度增強Fluorogold的可見度。Fluorochrome, LLC.公司1998年引進該抗體以來，不僅大量文獻研究證實其有效性，而且成為行業檢測的金標準。

產品優勢

1）Fluoro-Gold（熒光金）的產品優勢：

﹄ 極其強效的神經逆行熒光示蹤劑，靈敏度高且結果穩定；

﹄ 不會非特異性結合傳代中未損傷的纖維；

﹄ 不會滲出逆行標記的神經元；

﹄ 標記神經元存活周期廣，1天或者高于1個月；

﹄ 可用壓力注射或者離子透入（iontophoresed）的方法將染料導入動物體內；

﹄ 與zui常用的其他幾種神經解剖技術相兼容，比如免疫熒光術（IF），免疫細胞化學（ICC），放射自顯影技術，過氧化物酶免疫組化（HRP-IHC）,石蠟包埋和其他逆行熒光示蹤劑

﹄ 操作簡便安全，保質期長；*可靠的材料來源；

2）Fluoro-Gold（熒光金）與Fluoro-Gold抗體結合使用的優勢：

﹄ 大幅度增強熒光金標記的可視度；

﹄ 允許更的解剖標測

﹄ 顯示相當細微的解剖結構包含樹突，軸突和軸突末梢

應用圖片：

Left: VTA (40X) after Fluoro-Gold injection in the accumbens.  Antibody is at 1/100,000.

Right: Hypothalamic cells along the 3rd left ventricle (40X) after Flouro-Gold injection in the PVN.  Antibody is at 1/50,000.

產品使用

1）Fluoro-Gold（熒光金）單獨標記技術

﹄ 溶解體系（vehicle）：溶于蒸餾水，0.9%生理鹽水，或溶于0.2M中性磷酸鹽緩沖液配置成懸浮液

﹄ 染液濃度：有效染色濃度范圍1-10%。初次實驗推薦使用濃度4%。 如果注射部位發生意外壞死，或者標記過于密集，可降低濃度至2%。Fluoro-Gold分子量為532.6 daltons。

﹄ 注射方法：壓力注射；離子透入；或者晶體注入；

﹄ 術后存活時間：好的逆行神經示蹤標記一般在術后2天~2個月內觀察到。通常情況下術后的存活周期是3~5天。在染料不會向胞外擴散的前提下存活時間長能夠改善遠端神經末梢的填充。

﹄ 固定：差不多同所有固定方式兼容，或者也可不做固定；常常使用含4%甲醛的中性生理緩沖鹽作為固定劑。注：含高濃度重金屬（如鋨，汞）的固定劑會導致熒光淬滅，另外含高濃度（＞1%）戊二醛可能會加深背景熒光；

﹄ 組化處理：含Fluoro-Gold的組織樣本幾乎與所有通用的組化處理技術兼容，經常使用的是固定組織的冰凍切片（20 µm）。另還包含未固定組織的恒冷切片（10 µm）；塑料（0.2-4 µm）或石蠟（3-10 µm）包埋的薄切片；

﹄ 聯合檢測：切片進一步處理用于第二種標志物（marker）的檢測如放射自顯影，HRP組化分析；免疫細胞化學；第二種熒光示蹤劑；熒光素復染等等。

﹄ 封片，清洗和蓋片：切片通常黏附在明膠包被的載玻片上，風干，二甲苯浸漬，然后加入非熒光的DPX塑性封片劑來蓋片；

﹄ 觀察與拍照：熒光金可直接用熒光顯微鏡觀察，使用寬帶紫外激發濾光片。顏色：中性pH緩沖液處理組織發射金色光；酸性pH緩沖液（如pH=3.3）處理組織發射藍色；也可以用數碼拍照或者膠片曝光來記錄結果。

2）Fluoro-Gold（熒光金）+ Fluoro-Gold antibody（熒光金抗體）的組合標記技術

﹄ 抗體特性：兔多克隆（100 µl，1:100 dilutionl），BSA diluent (50 mM KPBS, 0.4% Triton, 1% BSA, 1% NGS)稀釋500~1,000×,與 Vector elite kit結合使用大概可做300~1000張切片。

﹄ 抗體使用：熒光金注射入動物體內之后，漂片（以灌注4%甲醛的大鼠腦組織切片，30 µm為例）在Fluoro-Gold 抗體工作液中4度孵育18小時后，清洗，然后用生物素化GAR（Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody ，1:1000，Cat#：BA-1000）室溫孵育1h，之后清洗。 切片再用Avidin/Biotin（1:1000， vector， Cat#:PK6100）孵育1h，之后轉入DAB顯色底物孵育6 mins（Diaminobenzidine (.04%) and Nickel Chloride (2.5%) in 0.1 M NaAcetate with 0.06% H2O2）。切片zui后進行清洗，組織黏合，干燥，脫水和蓋片。