jembio Tth 111 逆轉(zhuǎn)錄酶簡(jiǎn)介

 jembio Tth 111 逆轉(zhuǎn)錄酶            

在 Mn2+ 存在下，Thermus thermopilus 逆轉(zhuǎn)錄酶在升高的溫度下催化 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。

來源：嗜熱棲熱菌

描述：

• 適用于DNA 的高溫合成(1)。

• 從 RNA 模板合成 cDNA (2)。

• 導(dǎo)致引物雜交和RNA 延伸的特異性更高。

• 可以在高溫下逆轉(zhuǎn)錄 (2)。

• 最大限度地減少RNA 強(qiáng)二級(jí)結(jié)構(gòu)的問題。

• 用于對(duì)含有問題二級(jí)結(jié)構(gòu)的DNA 進(jìn)行高效PCR。

• 適用于RT-PCR；相同的酶用于逆轉(zhuǎn)錄和隨后擴(kuò)增獲得的 cDNA 模板 (2)。• 對(duì)從有問題的樣本中分離的模板 DNA 中存在的擴(kuò)增抑制劑具有抗性 (3,4)。          

  單位定義：一個(gè)單位是在 50°C 下 10 分鐘內(nèi)將 1 nmol dTTP 摻入酸不溶形式所需的酶量。

儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存于 –20°C。

儲(chǔ)存緩沖液：50 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 7.5）、5 mM 二硫蘇糖醇、0.1 mM EDTA、50% (v/v) 甘油和穩(wěn)定劑。檢測(cè)條件：40 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 8.5）、1 mM MnCl2、1 mg/ml 牛血清白蛋白、10 mM 二硫蘇糖醇、0.5 mM [α-??P] dTTP 和 0.4 mM poly(A)·( dT)50。

在 50°C 下在 50 ?l 反應(yīng)體積中孵育 10 分鐘。質(zhì)量控制：檢測(cè)所有制劑的污染核酸內(nèi)切酶、核酸外切酶、非特異性 RNase 以及單鏈和雙鏈 DNase 活性。

參考：

1. Wang, AM, Doyle, MV 和 Mark, DF (1989) Proc。納特爾。阿卡德?？茖W(xué)。美國 86、9717-9721。

2. Myers, TW, Gelfanld, DH (1991) Biochemistry 30, 7661-7666。

3. Kather, HL, Schwartz, I. (1994) Biotechniques 16, 84-92。

4. Poddar, SK, Sawyer, MH, Connor, JD (1998) J. Med。微生物。47, 1131-1135。