bioacademia 02-012說(shuō)明書

 bioacademia 02-012說(shuō)明書

Taq-DNA聚合酶經(jīng)濟(jì)性（-dNTPs），具有強(qiáng)健的緩沖液
02-012  200件，02-012-5 5件x 200件
儲(chǔ)存：儲(chǔ)存溫度-20?C。
濃度：5單位/μl
*注：一個(gè)單位是指能將10 nmol的總dNTPs并入的酶量
當(dāng)激活的鮭魚精子DNA被用作
模板/底漆。
儲(chǔ)存緩沖液：20毫米Tris HCl（pH 8.0），100毫米KCl，0.1毫米EDTA，1毫米DTT，50%甘油，0.5%
吐溫20，0.5%Igepal CA-630。
提供試劑：10 x強(qiáng)效緩沖液（Taq）
應(yīng)用：
1） 高通量PCR
2） 菌落PCR
3） dUTP、dITP和熒光標(biāo)記核苷酸的摻入
4） 底漆延伸
5） 在3’-鈍端添加一個(gè)單核苷酸（腺苷），用于克隆到TA載體。
背景：水熱菌DNA聚合酶（taqdna聚合酶）在大腸桿菌中表達(dá)
量大，純度高。該酶具有耐熱DNA聚合酶活性，且
分子量為94 kDa。這種酶適用于PCR反應(yīng)；能夠用不同的
底漆。
質(zhì)量保證：通過(guò)SDS-PAGE（CBB染色）測(cè)定純度大于95%（圖1）
證實(shí)缺乏核酸內(nèi)切酶和核酸外切酶。
PCR檢測(cè)：以?DNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，擴(kuò)增結(jié)果良好，達(dá)14個(gè)
kB（圖2）。
使用強(qiáng)效緩沖液（Taq）的注意事項(xiàng)：強(qiáng)效緩沖液可誘導(dǎo)大限度的酶活性。避免
在凝膠電泳分析中產(chǎn)生不希望出現(xiàn)的條帶，宜反應(yīng)時(shí)間為
建議如下：1）模板延伸時(shí)間約為5至10秒/kb，模板延伸時(shí)間為8kb，以及
大約15秒/kb，多14kb；2）用2步PCR設(shè)置大致相同的延長(zhǎng)時(shí)間
（穿梭PCR）和三步PCR；3）在沒(méi)有擴(kuò)增的情況下，通過(guò)小步延長(zhǎng)延伸時(shí)間
看到。采用二步PCR方法可以更快地檢測(cè)到擴(kuò)增產(chǎn)物。