Sumoylation控制試劑盒

 laebio K007說(shuō)明書(shū)

Sumoylation Control Kits 

Catalog # K007 supplied with proteins

 Sumoylation控制試劑盒

蛋白質(zhì)隨附的Sumoylation Control Kits 產(chǎn)品目錄號(hào)K007

描述：
該測(cè)定試劑盒包含用于常規(guī)檢測(cè)磺酰化活性的試劑。包含Sumoylation標(biāo)記（人類(lèi)拓?fù)洚悩?gòu)酶I蛋白），可以清楚地檢測(cè)反應(yīng)。已經(jīng)證明該測(cè)定法可用于粗提物。強(qiáng)烈建議將活躍的人EI（Cat＃P001; P006），活躍的人E II（Cat＃P002; P011）和活躍的人SUMO I（Cat＃P003; P012）與該套件一起使用。

K007套件包含：

• SAE I和SAE II（人類(lèi)EI）（貨號(hào)P006）
• UBC9（人類(lèi)E II）（貨號(hào)P011）
• SUMO I（活動(dòng)表格）。（貨號(hào)P012）
• 人DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I片段。（Cat＃B007）
• 抗拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體。（Cat＃AP006）（凍干的抗體應(yīng)在使用前用100ul H 2 O 復(fù)溶。）
• 10X磺酰化反應(yīng)緩沖液。（Cat＃B006）（10x緩沖液包含200 mM Hepes pH 7.5、50 mM MgCl 2和20 mM ATP。）

上述試劑可用于50次磺酰化反應(yīng)。

測(cè)定條件：
SUMO化測(cè)定在20微升的終體積在反應(yīng)緩沖液含有20毫摩爾的Hepes pH為7.5，5mM的氯化鎂進(jìn)行2，2mM的ATP。我們建議添加新鮮的2mM ATP，以確保提供足夠的能量。

拓?fù)洚悩?gòu)酶I糖基化控制方案：

1. 為每個(gè)反應(yīng)添加2ul 50 kd拓?fù)洚悩?gòu)酶I片段（Cat＃B007）作為底物。
2. 在每個(gè)反應(yīng)中，先向底物中加入2ul E2，然后加入2ul Sumo-1、2ul 10x反應(yīng)緩沖液（Cat＃B006），2ul E1和2ul 20 mM ATP。后，添加H 2 O使其總量達(dá)到20 ul 。
3. LAE磺酰化蛋白的反應(yīng)濃度如下：
   • EI：7.5 ug / ml
   • E II：50 ug / ml
   • SUMO-1：50 ug / ml
         對(duì)照分析的推薦條件是在37 o C下30?60分鐘。
    
4. 使用1000毫升稀釋的提供的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體在10毫升（目錄號(hào)AP006）中進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。應(yīng)檢測(cè)到四個(gè)主要的磺酰化帶。

用Topo-I抗體（目錄號(hào)AP006）對(duì)磺酰化的 50 Kd Topo-I蛋白（目錄號(hào)B007）進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡（12.5％凝膠）。泳道1：磺酰化的50Kd Topo-I片段；泳道2：未磺酰化的50Kd Topo-I片段。

Topo-I抗體（ Cat＃AP006）可檢測(cè)至少四個(gè)主要的磺酰化的Topo-I片段 。

Sumoylation協(xié)議：

1. 準(zhǔn)備合適的純化底物蛋白。
2. 在每個(gè)反應(yīng)中，先向底物中加入2ul E2，然后加入2ul Sumo-1、2ul 10x反應(yīng)緩沖液，2ul E1和2ul 20mM ATP。后，添加H 2 O以使終體積達(dá)到20 ul。
3. LAE蛋白的反應(yīng)濃度如下：
   • EI：7.5ug / ml
   • E II：50ug / ml
   • SUMO-1：50ug / ml

運(yùn)輸/存儲(chǔ)：
該套件隨干冰一起運(yùn)輸，應(yīng)在-70 o C或更低的溫度下存儲(chǔ)。  

法律上的考慮：僅供研究使用。