上海起發大量現貨alstembio VB100說明書

ALSTEM是一家位于灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產品和服務組合，為生物制藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專業知識的科學家創立。

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ViralBoost Reagent: #VB100

ViralBoost試劑：＃VB100

描述

ViralBoost試劑（500X）是一種新型的小分子混合物，可以增強病毒的產生，并且是有效包裝病毒的強大，廣泛適用的試劑。ViralBoost試劑在轉錄水平上穩定地調節病毒RNA的包裝，可將逆轉錄病毒或慢病毒顆粒的產量提高多達10倍。易于使用的協議使ViralBoost試劑非常適合各種規模的病毒包裝。

圖1.來自GFP反轉錄病毒轉導的HEK 293T細胞的流式細胞儀數據，GFP反轉錄病毒在不存在ViralBoost試劑的情況下包裝。

圖2. GFP慢病毒轉導的HEK 293T細胞，有和沒有ViralBoost包裝

ViralBoost試劑是一種新型的小分子混合物，可用于高滴度病毒生產，并且是有效包裝病毒的強大，廣泛適用的試劑。它在轉錄水平上穩定地調節病毒RNA的包裝，可以極大地提高逆轉錄病毒或慢病毒顆粒的產量，多可提高10倍。易于使用的協議使ViralBoost試劑非常適合各種規模的病毒包裝。

使用流程：

一天：轉染前一天，

1.用1x明膠涂板/盤子30分鐘。吸出明膠，并每100 mm平板接種約3-4 X 10 ^6個 HEK 293T細胞。每個板使用10 ml培養基。

注意：擁有良好的單細胞懸液（胰蛋白酶消化良好）并均勻分布細胞非常重要。

第二天：轉染

注意：按照制造商的規程準備轉染。

2.準備兩個試管，然后向每個試管中加入0.5 ml DMEM。在一個試管中加入DNA混合物（包含病毒載體和包裝混合物），并通過輕敲試管將其充分混合。在另一個管中，添加NanoFect（目錄號NF100）。通過互聯管混合。

注意：在室溫（20–25°C）下孵育不超過5分鐘。

3.將NanoFect-DMEM混合物轉移到DNA管中，上下吸移2-3次。渦旋5-10秒，充分混合。

4.在室溫下孵育約15分鐘，以使NanoFect / DNA復合物自組裝。

5.滴加NanoFect / DNA混合物到板中，輕輕搖動板并將板放回培養箱中

第三天：更換培養基并添加ViralBoost

6.用10 ml新鮮培養基代替上清液，并補充20 µl ViralBoost（500X）。將板返回細胞培養箱。

第四天：收集病毒

！注意小心處理病毒材料，避免溢出。使用漂白劑對危險液體進行消毒（終濃度為10％，持續30分鐘）。

7.將上清液收集在50 ml錐形管中，并置于冰上。離心機中以千克上清液10分鐘，以除去細胞碎片。（將離心機預設為4°C）

8.通過0.45 µm過濾器過濾上清液。將已過濾的上清液轉移至無菌容器中，并每隔4體積的含病毒上清液添加1體積的冷逆轉錄病毒/慢病毒沉淀溶液（4°C，目錄號VC100和VC200）。（例如：5毫升逆轉錄病毒/慢病毒沉淀溶液和20毫升病毒上清液）。

9.充分混合并冷藏過夜。

第五天：濃縮病毒

10.將混合物在4°C下以1500g離心30分鐘。離心后，病毒顆粒可能在容器底部呈米色或白色沉淀。

11.丟棄上清液。通過以1500g離心5分鐘來旋轉殘留溶液。抽吸去除所有液體，注意不要擾亂沉淀中沉淀的病毒顆粒。

12.使用冷的無菌PBS或DMEM在4°C下以原始體積的1/10至1/100重懸病毒沉淀。分裝在低溫小瓶中，并在-80°C下儲存直至準備使用。

注意：可以使用病毒濃縮/純化程序除去ViralBoost試劑。當直接用于轉導HEK 293T細胞時，尚未檢測到帶有ViralBoost試劑的病毒顆粒粗品對目的基因表達的副作用，但不同細胞系之間可能存在差異。建議事先測試ViralBoost對靶細胞的作用。