encapsula CLD-8927說明書

Fluoroliposome®-DiA

SKU# CLD-8927

描述

有五種熒光對照脂質體產(chǎn)品（Fluoroliposome®）用于Clodrosome®（氯膦酸鹽脂質體）。所有五種熒光脂質體在其膜內摻入親脂性染料。它們不溶于水; 然而，當摻??入膜中時，它們的熒光很容易檢測到。DiI，DiO，DiD，DiR和DiA覆蓋范圍廣泛的激發(fā)和發(fā)射波長，從300s到900s。DiI和DiO具有約65nm的熒光激發(fā)和發(fā)射大值，便于雙色標記。DiA的發(fā)射光譜非常寬，根據(jù)所使用的濾光器，可以將其檢測為綠色，橙色或甚至紅色熒光。DiI，DiO，DiD和DiR屬于二烷基羰基青化物類化合物。二烷基羰花青的光譜性質很大程度上與烷基鏈的長度無關。相反，它們由端子環(huán)系統(tǒng)中的雜原子和連接橋的長度決定。它們在脂質環(huán)境中具有*的消光系數(shù)，中等的熒光量子產(chǎn)率和短的激發(fā)態(tài)壽命（約1ns）。各染料的熒光光譜如下所示。

您可以根據(jù)實驗室中使用的熒光設備和過濾器的類型選擇Fluoroliposome®。Clodronate脂質體不能簡單地制成熒光，因為標記的Clodrosome®可能會產(chǎn)生不準確和/或無法解釋的數(shù)據(jù)。有關更多信息，請參閱技術說明部分。

DiA的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜。

巨噬細胞攝取含有DiA的熒光脂質體。

技術信息

Fluoroliposome®-DIA

熒光染料	激發(fā)/發(fā)射（nm）	濃度（mg / ml）	濃度（mM）
4-（4-（二十六烷基氨基）苯乙烯基）-N-甲基吡啶碘化物（DiA）	五百九十〇分之四百五十六	0.0625	0.0794

技術說明

• 熒光Clodrosome®的問題與標記的Clodrosome®產(chǎn)生的不準確和/或無法解釋的數(shù)據(jù)的可能性有關。當Clodrosome®誘導巨噬細胞凋亡時，在吞噬溶酶體中被破壞和代謝的摻入Clodrosome®的熒光脂質將分散在殘留的凋亡小體中，隨后被其他巨噬細胞吞噬。因此，可以在吞噬細胞中檢測到熒光脂質，所述吞噬細胞從未吞噬Clodrosome，特別是當利用FACS或熒光透視檢測熒光細胞（FACS）或組織勻漿中的熒光水平（熒光透視）時。另一種潛在的偽影來自于細胞外“垃圾”中殘留的熒光脂質，其尚未被其他吞噬細胞清除，產(chǎn)生高背景熒光。然而，經(jīng)驗豐富的共聚焦顯微鏡可能能夠區(qū)分由熒光完整脂質體產(chǎn)生的點狀熒光與破壞脂質體的更多彌散熒光特征，并且一些已成功使用熒光氯膦酸鹽脂質體通過共聚焦顯微鏡觀察這些脂質體的細胞位置體內 [1]。另一個復雜因素是公布的數(shù)據(jù)在氯膦酸鹽脂質體開始在巨噬細胞中誘導細胞凋亡時確切地變化很大。Mönkönnnen  等。表明巨噬細胞死亡在體外對RAW264細胞進行氯膦酸鹽脂質體處理后的個小時內是可測量的[2]，而許多人報告在體內治療后數(shù)小時內沒有出現(xiàn)巨噬細胞凋亡的跡象。數(shù)據(jù)的可變性可能是由于氯膦酸鹽的不同脂質體制劑以及極其不同的實驗條件。因此，與大多數(shù)生物學研究一樣，特別是那些涉及脂質體的研究，需要在每個實驗模型中建立用氯膦酸鹽脂質體處理動物或細胞與凋亡發(fā)生之間的時間量。如果研究的性質要求跟蹤Clodrosome®而不是對照，Encapsula可根據(jù)要求提供DiI標記的Clodrosome®，并假設Clodrosome®分布可在凋亡發(fā)生前明確評估，清晰有效的數(shù)據(jù)關于熒光Clodrosome®的生物分布應該是可以獲得的。但是，對于大多數(shù)用途，
• 當在正常動物體內監(jiān)測單核細胞攝取時，由于脂質體吞噬作用后單核細胞的邊緣化，循環(huán)的單核細胞可能在注射后的前2小時內“消失”或顯示減少的計數(shù)。這些細胞將在幾小時內重新進入血液循環(huán)。Sunderkötter  等人。證明這種現(xiàn)象并詳細討論這種行為。還要考慮循環(huán)單核細胞的壽命約為24小時，因為單核細胞老化，標記的單核細胞將不斷離開循環(huán)，即使在正常動物中也是如此[3] 。
• 當不受干擾超過幾個小時時，脂質體可能會沉淀下來。在即將使用之前，為了確保均勻的脂質體懸浮液，將樣品瓶緩慢倒轉數(shù)次，直到通過目視檢查使懸浮液看起來均勻。劇烈或不穩(wěn)定的搖動不會損害脂質體，但可能引起泡沫和氣泡形成，使得更難以測量所需劑量。
• 如果進行靜脈注射的人員沒有經(jīng)歷或熟悉注射大量（約10％動物重量，以ml計），粘性液體或微粒懸浮液的預防措施，考慮在發(fā)生嚴重注射相關不良事件的情況下可以使用額外的動物。劑量控制動物首先熟悉大量注射。
• 當靜脈內給藥時，使用標準預防措施向動物給藥較大劑量，包括以下內容：a）在給藥前將產(chǎn)品加熱至室溫。b）確保在給藥前從注射器中除去所有氣泡; 靜脈注射氣泡可能會導致空氣栓塞，從而導致動物死亡或嚴重受傷。c）以不超過1毫升/分鐘的緩慢，穩(wěn)定的速度注入產(chǎn)品; 如果動物表現(xiàn)出任何非典型反應，例如異常激動，則降低輸注速度。
• 輸注相關的不良反應通常涉及動物喘氣以進行空氣或其他類似癲癇發(fā)作的運動。動物通常在沒有明顯持久性損傷的情況下恢復，但研究人員必須評估對實驗結果的任何潛在影響。
• 脂質體應保持在4°C，切勿冷凍。

出現(xiàn)

Fluoroliposome®-DiA是由大微米尺寸多層脂質體制成的黃色液體懸浮液。由于它們的大尺寸，一些脂質體可能沉淀到小瓶的底部。如果閑置在冰箱中，F(xiàn)luoroliposome®-DiA將相分離并在小瓶底部形成顆粒，在頂部留下清澈的溶液。因此，應在使用前搖動小瓶以形成均勻的溶液。

儲存和保質期

存儲

Fluoroliposome®產(chǎn)品應始終在4°C??的黑暗中儲存，除非在動物給藥前短時間內置于室溫。不要凍結。ENS不對冷凍產(chǎn)品產(chǎn)生的結果負責。

保質期

Fluoroliposome®產(chǎn)品每天生產(chǎn)。裝運的批次是在同一天生產(chǎn)的。建議在生產(chǎn)日期后60天內使用產(chǎn)品。