Polysciences PEI溶液配制說(shuō)明書

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美國(guó)POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生產(chǎn)和經(jīng)營(yíng)LIFE SCIENCES生命科學(xué)（膠體金,不含甲醛的甲醇等），病理學(xué)和顯鏡學(xué) 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產(chǎn)品。polysciences公司是世界上zui大zui全的多聚化合物供應(yīng)商,同時(shí)是世界*的免疫學(xué),組織化學(xué)試劑耗材供應(yīng)商.

Polysciences PEI溶液配制說(shuō)明書

——線性聚乙烯亞胺, #23966,1mg/ml轉(zhuǎn)染試劑的配制

轉(zhuǎn)染試劑線性PEI溶液的配制

聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉(zhuǎn)染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉(zhuǎn)染效率zui高。

下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過(guò)程。

1.產(chǎn)品特性:

產(chǎn)品名稱：線性聚乙烯亞胺(PEI)

2.溶液配制

此指導(dǎo)說(shuō)明書是經(jīng)polysciences公司研究，測(cè)試及其客戶反饋的后編寫的。下面推薦一種簡(jiǎn)單適用而的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉(zhuǎn)染試劑的配制。

材料：

1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級(jí)水）、12 M鹽酸、10 M氫氧化鈉、一次性0.1-0.2µm PES真空無(wú)菌過(guò)濾器、無(wú)菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

器材：

1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準(zhǔn)pH計(jì)、2支1 mL塑料移液管、托盤、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵

配制過(guò)程：

1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調(diào)pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調(diào)pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補(bǔ)足至1L——真空過(guò)濾消毒——分裝，-20°C保存。

備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn)攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

試劑儲(chǔ)存：

冷凍部分溶液可在-20°C保存長(zhǎng)達(dá)一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復(fù)凍融。

粉末儲(chǔ)存：

未開(kāi)封的粉末有效期兩年?？稍谑覝叵卤４嬷敝潦褂谩?/span>

參考文獻(xiàn)：

1.聚乙烯亞胺（PEI）、線性 (1 mg/mL). Cold Spring Harbor Protocols 2008, pdb.rec11323–pdb.rec11323 (2008). doi:10.1101/pdb.rec11323.

Catalog# 23966 –Polyethylenimine, Linear, MW 25000 (PEI 25K)

Transfection Reagent Preparation and Storage Recommendations

These guidelines are our recommendations based off research, testing, and customer feedback. There are alternative methods available, but we suggest following these recommendations for easy adoption and consistently high performance. These methods are adapted from Cold Spring Harbor Protocols [1], an excellent secondary resource for transient transfection literature.

Reagent Preparation (1 mg/mL)

Materials:

1. 1g PEI 25K (Polysciences Catalog# 23966).

2. 1L Milli-Q® water, water for injection (WFI), or comparable biological-grade water

3. 12 M Hydrochloric Acid (HCl)

4. 10 M Sodium Hydrochloride (NaOH)

5. Disposable 0.1-0.2µm PES vacuum sterile-filter.

6. Sterile HDPE or polypropylene storage vials for reagent aliquots.

Equipment

1. 1L glass beaker

2. 1L glass graduated cylinder

3. Calibrated pH meter

4. 2 x disposable 1mL plastic pipettes

5. Stir plate

6. PTFE coated stir bar

7. Vacuum pump

Method:

1. Dispense 1g of PEI 25K into beaker and suspend in 900 mL of water.

2. Add stir bar and set stirring to produce a small vortex.

3. Add hydrochloric acid dropwise until pH is < 2.0.

4. Cover top of beaker and stir for up to 3 hours until powder fully dissolves.

5. Add sodium hydroxide dropwise until pH is 6.9-7.1.

6. Transfer solution to graduated cylinder and add water until the total volume is 1L.

7. Sterile-filter through vacuum membrane.

8. Aliquot as desired and store at -20°C.

Reagent Storage

Frozen aliquots can be stored at -20°C for up to one year. Aliquots can be thawed and kept at 4°C for up

to two weeks, but should never be re-frozen.

Powder Storage

Unopened powder has a shelf life of two years from date of receipt. It can be kept at room temperature

until use.

References

1. Polyethylenimine (PEI), linear (1 mg/mL). Cold Spring Harbor Protocols 2008, pdb.rec11323-pdb.rec11323 (2008). doi:10.1101/pdb.rec11323

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